昆虫工程细胞





产品介绍
昆虫工程细胞

Tn5ET
 
一、细胞简介
    携带GFP报告基因的工程细胞系Tn5ET,为一种携带绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein, 简称GFP)基因的昆虫细胞系—粉纹夜蛾(Trichoplusia ni) Tn5ET,能快速检测重组杆状病毒滴度、空斑筛选单粒病毒和指示蛋白质表达生产。当杆状病毒感染以上细胞时,立即激活绿色荧光蛋白基因的表达。借助荧光显微镜,可直接观察杆状病毒的复制状况。工程细胞系Tn5ET用于病毒滴度的快速检测,其病毒滴度检测灵敏度比Sf9EP细胞系高出约100倍。工程细胞系Tn5ET用于空斑实验,从而借助荧光显微镜直观病毒空斑纯化单粒病毒。在杆状病毒表达系统的应用中,大量表达、生产蛋白质通常采用Tn5细胞系,因此,工程细胞系Tn5ET也可以用于规模化表达生产蛋白质如病毒疫苗等,通过荧光指示掌握病毒复制状况,从而指导蛋白质生产。目前,利用杆状病毒表达系统成功表达了数以千计的重组蛋白。由于杆状病毒表达系统多采用重组非包涵体病毒作为表达载体,因病毒粒子小,无法在光学显微镜下观察,使得病毒滴度的测定、空斑纯化病毒以及在蛋白质表达生产中了解病毒复制状况十分困难。采用工程细胞Tn5ET使得病毒滴度的测定、空斑纯化病毒及了解病毒复制状况十分简便。

 二、细胞用途
1.工程细胞系Tn5ET用于病毒滴度的快速检测,其病毒滴度检测灵敏度比Sf9EP细胞系高出约100倍,使得到的病毒滴度数据更加准确;
2.工程细胞系Tn5ET用于病毒空斑筛选,可以直观纯化重组杆状病毒得到单粒病毒;
3.工程细胞系Tn5ET用于规模化表达生产蛋白质如病毒疫苗等,通过荧光指示掌握病毒复制状况,从而指导蛋白质生产。
 

 图1  病毒滴度实验,重组杆状病毒感染Tn5ET细胞4天时,在荧光显微镜下GFP阳性结果
专利产品,未经许可,不得用于商业目的(专利号:ZL 2014 1 0378780 .3)

图2  杆状病毒感染Tn5ET细胞3天时,在荧光显微镜下GFP效果
 


 、培养条件  
Grace’s  Medium                        500 ml
FBS                                               50 ml 
pH 6.2
渗透压 380 +/-5  (mOsm/kg•H2O) ,用D-Glucose 调节培养基的渗透压,0.5 g D-Glucose 使500 ml 培养基上升约7 mOsm;
0.22 µm 滤膜过滤, 4 ºC保存备用;27ºC培养。

、Grace 改良培养基(500ml装)
       该培养基适用于Sf9、Sf21、Tn5、Tn5ET和Sf9EP细胞系,既可以培养Sf9、Sf21细胞系,也可以培养Tn5细胞系。与市场上其他商业培养基相比,该培养基不仅使细胞生长更好,而且可提高重组杆状病毒的蛋白质表达量,在相同的条件下,可使蛋白质产量提高至1倍以上,是昆虫细胞培养和蛋白质生产的最佳培养基。



  

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